Zellfraktion – Auftrennung von Zellorganellen
Homogenisierung
- Zerkleinerung des Gewebes in einer Pufferlösung bei einem pH-Wert um 7
- im Homogenisator (Glasgefäß mit eingeschliffenem Kolben) werden die Zellen schonend aufgebrochen, in den Kolben drehend auf und ab bewegt wird
- Zellen platzen zwischen Kolben und Glaswand auf
- dünnflüssiger Brei aus unzerstörten Zellen und Zellorganellen- Zellhomogenat wird Weiterverarbeitet
Differentielle Zentrifugation
- Zellbestandteile werden in der Zentrifuge getrennt
- sie setzen sich während der Zentrifugation in der Reihenfolge abnehmender Größe und Dichte ab
- zur Auftrennung wählt man verschiedene Umdrehungsgeschwindigkeiten; dabei auftretende Zentrifugalbeschleunigung werden als Vielfaches der Erdbeschleunigung angegeben; Ultrazentrifugen erreichen z.B. 500000g
- damit lassen sich sogar kleine Teilchen wie Proteine sedimentieren
Dichtegradientenzentrifugation
- die Probe wird auf einem Dichtegradienten gebracht; das ist eine Lösung von Rohrzucker oder Caesiumchlorid, die mit von unten nach oben abnehmender Dichte in ein Zentrifugenglas eingebracht wird
- auf die Oberfläche eines solchen Gradienten bringt man jetzt die Probe des Zellhomogenats und zentrifugiert in der Ultrazentrifuge
- die Zellbestandteile sedimentieren jeweils nur so weit, bis sie in die Zone ihrer Dichte gelangen
- mit dieser Methode kann man Teilchen gleicher Größe, aber geringerem Dichteunterschied, auftrennen
